一、启动诱导（一）母株的选择 。母株的选择应遵循三项基本原则：1.整个群体表现出该品种的典型性状；2.群体生长发育良好，没有普遍发生特定病害浸染，特别是东亚兰花叶病毒，齿舌兰轮斑病毒；3.在符合上述条件的群体中选择性状优异的健壮单株作母株 。（二）外植体处理 。选择叶片未完全展开的肥壮营养芽（勿选花芽）为外植体，先剥去2～3片外层叶片，再手持兰花叶芽梢，切去基部胜物及损伤、老化组织，最后逐层剥净外层叶片，直至有小顶芽和小侧芽露出 。然后在超净工作台上先用70%的酒精浸泡外植体30秒，用无菌水冲洗后，再放入0.1%的氯化汞溶液中浸泡8分钟左右，再用无菌水冲洗3～4次，然后在无菌接种盘上小心切下顶芽和侧芽 。（三）圆球茎诱导与驯化 。将切下的顶芽和侧芽插入诱导培养基中，基部向下，稍稍露出芽尖 。然后将其置于培养室中进行培养，光照强度1000～1500勒克斯，光照时间每天14小时，培养温度25℃左右 。10天后芽开始萌动，诱导率在85%以上 。在圆球茎的诱导过程中，有80% 左右的芽萌发后很容易长成小苗 。诱导30天后，待小苗长至4厘米、基部膨大时，将苗切离基部，并将膨大基部纵切成厚3～4毫米的薄片，切口向下重新放入相同的新鲜培养基中，30～35天从下端切口部位可长出类似愈伤组织的圆球茎，其中顶芽诱导率最高，诱导速度也最快，侧芽次之 。第二，继代增殖和幼苗分化 。将圆球茎接种在继代培养基中，然后放入培养室培养 。培养温度25℃左右，光照强度3000勒克斯，每天光照时间10小时 。每45 ~ 50天传代一次，增殖倍数可达10倍以上 。继代培养初期，浓度为1.5×10-6 ~ 2×10-6的6-BA(植物生长调节剂)可快速积累材料 。随着继代培养次数的增加，特别是第15代以后或突变体植株出现后，只能使用浓度为0.5×10-6 ~ 1.5×10-6的6-BA(植物生长调节剂)，并在生产中 。突变的圆球茎表面只有光滑，没有芽尖，不能分化成芽 。当圆球茎继代培养到需要的数量时，将整个圆球茎直接转移到新鲜的增殖培养基中，直接将圆球茎表面的芽尖分化萌发成苗，无需剪去或切断 。【大花蕙兰组织培养工厂化生产技术】第三部分 。生根炼苗当幼苗长到3厘米高，有2 ~ 3片叶子时，小心地将幼苗从基部切下，转移到壮苗生根培养基中，然后放入培养室中在25℃ ~ 28℃和5000 ~的光照强度下培养 。移栽前将大花蕙兰瓶苗移入遮阳棚内，在自然散射光(7000 ~ 8000勒克斯)环境下放置15 ~ 20天，每天8 ~ 12小时，可明显提高瓶苗质量和定植成活率 。当瓶苗叶片深绿色，叶片坚实，植株健壮时，即可移栽瓶苗 。
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