琼脂糖凝胶电泳,琼脂糖凝胶电泳检测DNA( 二 )


在缓冲液中加入EDTA,可以鳌合二价离子,抑制DNase,保护DNA 。
缓冲液pH常偏碱性或中性,此时核酸分子带负电,向正极移动 。
核酸电泳中常用的染色剂是溴化乙锭(ethidium?bromide?EB) 。溴化乙锭是一种扁平分子,可以嵌入核酸双链的配对碱基之间 。在紫外线照射BE-DNA复合物时,出现不同的效应 。
254nm的紫外线照射时,灵敏度更高,但对DNA损伤严重;360nm紫外线照射时,虽然灵敏度较低,但对DNA损伤小,所以适合对DNA样品的观察和回收等操作 。300nm紫外线照射的灵敏度较高,且对DNA损伤不是很大,所以也比较适用 。
使用溴化乙锭对DNA样品进行染色,可以在凝胶中加入终浓度为0.5μg/ml的EB 。EB掺入DNA分子中,可以在电泳过程中随时观察核酸的迁移情况,但是如果要测定核酸分子大小时,不宜使用以上 *** ,而是应该在电泳结束后,把凝胶浸泡在含0.5μg/mlEB的溶液中10~30min进行染色 。BE见光分解,应在避光条件下4℃保存 。
参考资料:百度百科-琼脂糖凝胶电泳
参考资料:百度百科-凝胶电泳
3琼脂糖凝胶电泳的原理是什么?琼脂糖凝胶电泳是以琼脂糖为介质,对不同大小的DNA 或 RNA 实现分离的一种电泳 ***。琼脂糖是一种多糖,具有亲水性,但是不带电荷 。
使得 DNA 在碱性条件下使其带负电荷(pH8.0 的缓冲液),在电流作用下,以琼脂糖凝胶为介质,由负极向正极移动,根据不同的 DNA 分子片段的大小和形状不同,在电场中泳动的速率也不相同,同时在样品中加入染料能够和DNA 分子间形成络合物,经过紫外照射,可以看到 DNA 的位置,从而达到分离、鉴定的目的 。
琼脂糖凝胶电泳注意事项
底板一定要用胶带封紧,否则灌胶时凝胶会漏出 。可以在灌胶时先倒少量凝胶在交界处,利用凝固的凝胶将其封紧 。
梳子一定不能插到底部,应距离底部1-2mm,否则拔梳子时容易弄破凝胶,导致漏胶,加热时应注意不要让琼脂糖沸腾得太厉害,稍稍沸腾至溶液清凉,即其全部溶解即可,过度沸腾会导致凝胶实际浓度的提高 。
将凝胶放入电泳槽时要注意极性,不要正负极颠倒 。要注意撕去两端的封带,凝胶的浓度与待分离的DNA的大小有关 。一般浓度为1%,低浓度的胶特别易碎,要注意 。

琼脂糖凝胶电泳,琼脂糖凝胶电泳检测DNA

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