浙江龙网

  1. 首页 > 生活百科 > >

琼脂糖凝胶电泳，琼脂糖凝胶电泳检测DNA

生活百科

大家好，关于琼脂糖凝胶电泳很多朋友都还不太明白，不知道是什么意思，那么今天我就来为大家分享一下关于琼脂糖凝胶电泳检测DNA的相关知识，文章篇幅可能较长，还望大家耐心阅读，希望本篇文章对各位有所帮助！
1琼脂糖凝胶电泳的原理是什么?原理如下：
琼脂糖凝胶电泳是用琼脂糖作支持介质的一种电泳 ***。其分析原理与其他支持物电泳最主要区别是：它兼有“分子筛”和“电泳”的双重作用 。
琼脂糖凝胶具有 *** 结构，物质分子通过时会受到阻力，大分子物质在涌动时受到的阻力大，因此在凝胶电泳中，带电颗粒的分离不仅取决于净电荷的性质和数量，而且还取决于分子大小，这就大大提高了分辨能力 。
但由于其孔径相比于蛋白质太大，对大多数蛋白质来说其分子筛效应微不足道，现广泛应用于核酸的研究中 。
目前多用琼脂糖为电泳支持物进行平板电泳，其优点如下：
(1)琼脂糖凝胶电泳操作简单，电泳速度快，样品不需事先处理就可以进行电泳 。
(2)琼脂糖凝胶结构均匀，含水量大（约占98%~99%)，近似自由电泳，样品扩散较自由电流，对样品吸附极微，因此电泳图谱清晰，分辨率高，重复性好 。
(3)琼脂糖透明无紫外吸收，电泳过程和结果可直接用紫外光灯检测及定量测定 。
(4)电泳后区带易染色，样品极易洗脱，便于定量测定 。制成干膜可长期保存 。
以上内容参考：百度百科-琼脂糖凝胶电泳
2琼脂糖凝胶电泳的原理什么琼脂糖凝胶电泳的原理：琼脂糖凝胶电泳是常用的用于分离、鉴定DNA、RNA分子混合物的 *** ，这种电泳 *** 以琼脂凝胶作为支持物，利用DNA分子在泳动时的电荷效应和分子筛效应，达到分离混合物的目的 。
DNA分子在高于其等电点的溶液中带负电，在电场中向阳极移动 。在一定的电场强度下，DNA分子的迁移速度取决于分子筛效应，即分子本身的大小和构型是主要的影响因素 。DNA分子的迁移速度与其相对分子量成反比 。
不同构型的DNA分子的迁移速度不同 。如环形DNA分子样品，其中有三种构型的分子：共价闭合环状的超螺旋分子（cccDNA）、开环分子(ocDNA)、和线形DNA分子(IDNA) 。这三种不同构型分子进行电泳时的迁移速度大小顺序为:cccDNA＞IDNA＞ocDNA
核酸分子是两性解离分子，pH3.5是碱基上的氨基解离，而三个磷酸基团中只有一个磷酸解离，所以分子带正电，在电场中向负极泳动；而?pH8.0-8.3时，碱基几乎不解离，而磷酸基团解离，所以核酸分子带负电，在电场中向正极泳动 。
不同的核酸分子的电荷密度大致相同，因此对泳动速度影响不大 。在中性或碱性时，单链DNA与等长的双链DNA的泳动率大致相同 。
扩展资料
影响核酸分子泳动率的因素
1、样品的物理性状
即分子的大小、电荷数、颗粒形状和空间构型 。一般而言，电荷密度愈大，泳动率越大 。但是不同核酸分子的电荷密度大致相同，所以对泳动率的影响不明显 。
对线形分子来说，分子量的常用对数与泳动率成反比，用此标准样品电泳并测定其泳动率，然后进行DNA分子长度（bp）的负对数——泳动距离作标准曲线图，可以用于测定未知分子的长度大小 。
DNA分子的空间构型对泳动率的影响很大，比如质粒分子，泳动率的大小顺序为：cDNA＞IDNA＞ocDNA但是由于琼脂糖浓度、电场强度、离子强度和溴化乙锭等的影响，会出现相反的情况 。
2、支持物介质
核酸电泳通常使用琼脂糖凝胶和聚丙烯酰胺凝胶两种介质，琼脂糖是一种聚合链线性分子 。含有不同浓度的琼脂糖的凝胶构成的分子筛的网孔大小不同，是于分离不同浓度范围的核酸分子 。聚丙烯酰胺凝胶由丙烯酰胺（Acr）在N,N,N′-四甲基乙四胺（TEMED）和过 *** 铵（AP）的催化下聚合形成长链，并通过交联剂N,N′-亚甲双丙烯酰胺（Bis）交叉连接而成，其网孔的大小由Acr与Bis的相对比例决定 。
琼脂糖凝胶适合分离长度100至60的分子，而聚丙烯酰胺凝胶对于小片段（5bp-500bp）的分离效果更好 。选择不同浓度的凝胶，可以分离不同大小范围的DNA分子 。
3、电场强度
电场强度愈大，带点颗粒的泳动越快 。但凝胶的有效分离范围随着电压增大而减小，所以电泳时一般采用低电压，不超过4V/cm 。而对于大片段电泳，甚至用0.5-1.0V/cm电泳过夜 。进行高压电泳时，只能使用聚丙烯酰胺凝胶 。
4、缓冲液离子强度
核酸电泳常采用TAE、?TBE、TPE三种缓冲系统，但它们各有利弊 。TAE价格低廉，但缓冲能力低，必须进行两极缓冲液的循环 。TPE在进行DNA回收时，会使DNA污染磷酸盐，影响后续反应 。所以多采用TBE缓冲液 。

推荐阅读


上一篇：信用证不可以贷款吗「信用证不可以贷款吗为什么」

下一篇：zara旗下品牌有哪些卖高跟鞋 zara旗下品牌有哪些