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PCR原理是生物学的聚合酶链反应 。PCR技术的基本原理类似于DNA的天然复制过程,其特异性依赖于与靶序列两端互补的寡核苷酸引物 。PCR是利用DNA在体外摄氏95°高温时变性会变成单链,低温(经常是60°C左右)时引物与单链按碱基互补配对的原则结合,再调温度至DNA聚合酶最适反应温度(72°C左右),DNA聚合酶沿着磷酸到五碳糖(5'-3')的方向合成互补链 。
pcr反应特点:
1.特异性强 。
引物与模板的结合及引物链的延伸是遵循碱基配对原则的 。聚合酶合成反应的忠实性及TaqDNA聚合酶耐高温性,使反应中模板与引物的结合(复性)可以在较高的温度下进行,结合的特异性大大增加,被扩增的靶基因片段也就能保持很高的正确度 。再通过选择特异性和保守性高的靶基因区,其特异性程度就更高 。
2.灵敏度高 。
【pcr原理是什么?】PCR产物的生成量是以指数方式增加的,能将皮克(pg=10-12)量级的起始待测模板扩增到微克(μg=-6)水平 。能从100万个细胞中检出一个靶细胞;在病毒的检测中,PCR的灵敏度可达3个RFU(空斑形成单位);在细菌学中最小检出率为3个细菌 。
3.简便快速 。
PCR反应用耐高温的Taq DNA聚合酶,一次性地将反应液加好后,即在DNA扩增液和水浴锅上进行变性-退火-延伸反应,一般在2~4小时完成扩增反应 。扩增产物一般用电泳分析,不一定要用同位素,无放射性污染、易推广 。
4.纯度要求低 。
不需要分离病毒或细菌及培养细胞,DNA粗制品及RNA均可作为扩增模板 。可直接用临床标本如血液、体腔液、洗嗽液、毛发、细胞、活组织等DNA扩增检测 。
以上内容参考:百度百科-聚合酶链式反应
PCR技术的基本原理:
该技术是在模板DNA、引物和四种脱氧核糖核苷酸存在下,依靠于DNA聚合酶的酶促合成反应 。DNA聚合酶以单链DNA为模板,借助一小段双链DNA来启动合成,通过一个或两个人工合成的寡核苷酸引物与单链DNA模板中的一段互补序列结合,形成部分双链 。
在适宜的温度和环境下,DNA聚合酶将脱氧单核苷酸加到引物3′-OH末端,并以此为起始点,沿模板5′→3′方向延伸,合成一条新的DNA互补链 。
PCR技术的应用:
PCR技术首次临床应用就是从检测镰状细胞和β-地中海贫血的基因突变开始的 。
PCR在医学检验学中最有价值的应用领域就是对感染性疾病的诊断 。理论上,只要样本有一个病原体存在,PCR就可以检测到 。
PCR技术不但能有效的检测基因的突变,而且能准确检测癌基因的表达量,可据此进行肿瘤早期诊断、分型、分期和预后判断 。
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