做标准曲线的12个经典问题 校准曲线( 二 )


如果回归方程直接投入使用 , 不经过上述检查和处理 , 必然会将差值引入测量结果 , 相当于解决了a的系统误差 。
(3)坡度试验:
即检验分析方法的灵敏度 , 灵敏度随实验条件的变化而变化 。在相同的分析条件下 , 运行中随机误差引起的斜率变化不应超过一定的允许范围 , 该范围随分析方法的精度而变化 。例如 , 一般来说 , 分子吸收分光光度法要求其相对差值小于5% , 而原子吸收分光光度法要求其相对差值小于10%等 。
6.标准曲线有效期的规定?
(1)标准曲线属于实验室质量控制范围 。根据《实验室资质认定与评价标准》中的结果控制要求 , 定期使用认证标准物质(参考物质)进行监测和/或使用二级标准物质(参考物质)进行内部质量控制 。
(2)指南中没有关于“定期”的规定 , 所以如果是“定期” , 就要根据实验室的实际情况来决定 。
(3)由于指南中没有说明 , 根据一般分析教材 , 当实验条件(包括试剂、人员、仪器等)发生变化时 。)变化 , 最好把标准曲线再做一遍 。一般来说 , 如果仪器使用时间长 , 经过验证 , 处于稳定状态 , 人员和试剂的变化往往比较大 。如果说每次换个人操作都要换曲线 , 那工作量就太大了 。
7.每次启动机器都要做标准曲线吗?
从药物检测的要求来看 , 因为:
1.每天的流动相都会不一样 , 导致峰时间和峰面积有一定的差异 。
2.探测器的光能也在不断减弱 , 所以它的对应值每天都不一样 , 峰值面积也不一样 。
基于以上原因 , 原则上应每天校准标准曲线 。
不要每次都做标准曲线 , 但每次都要输入标准样品;因为每次你的流动相不可能和原来的完全一样 , 仪器的状态也在变化 , 不同批次之间的保留时间不一致 , 所以必须用随附的标准品进行定位和定量 。
8.校准曲线可以长期使用吗?
对于每批样品 , 应测量校准曲线中点处标准溶液的浓度 。测量浓度与校准曲线标准点浓度的相对误差不应超过规定范围 。如果相对误差超过规定范围 , 应重新绘制校准曲线 。
也可以说 , 不同的分析项目和方法 , 标定曲线斜率的稳定性是不同的 。如果校准曲线的斜率相对稳定 , 则在样品分析期间只能测量两个标准点 。当这两个标准点与原始曲线对应点的相对偏差小于5%时 , 可以使用原始校准曲线 。因此 , 在进行样品分析之前 , 有必要根据边坡的稳定性来确定是否应同时制作校准曲线 。
我们一般的做法是按照测试的频率来做 。如果项目需要每天测试 , 而且测试量大 , 要求每周至少做一次曲线 。如果一个月订单不多 , 一个月做一次曲线 。当然 , 如果仪器出现故障 , 大修后又回来 , 曲线需要验证后重新做 。
9.标准曲线必须穿过原点吗?
标准曲线不一定要过原点 , 只要线性好就行 。因为如果你做空白色 , 基本上不会越过原点 。通过原点是强制性的 , 实际曲线可能不会通过 , 会造成误差 。但起源是由于系统误差 。
原点(0 , 0)是否被越过的问题可以从原点(0 , 0)所代表的意义来考虑:
即当被测成分的浓度为零时 , 信号响应值(即液相色谱的峰高或峰面积)是否也为零 。一般来说 , 色谱分析属于这种情况 , 所以(0 , 0)点可以作为浓度水平包含在标准曲线中(甚至不需要配制浓度为零的标准溶液进行采样) , 这也是单点法定量化的依据;然而 , 用光谱法测量时 , 类似的情况没有意义 。浓度为零的标准溶液(背景)的响应信号(吸光度)往往不为零 , 所以此时标准曲线不一定要穿过原点 。
10.标准曲线的线性范围?
大家都知道线性范围 , 主要是从相关系数r开始 , 一般要求r大于等于三个9 。在以往的实验中 , 有时当浓度较高时 , 线性不好 , 高浓度点不在标准曲线上 , 而是在标准曲线之下 , 离拟合的标准曲线较远 。在这种情况下 , 标准曲线的线性相关系数很差 , 有时只有9 。最后我终于想通了 , 如果用手动拟合 , 用光滑曲线连接所有的点 , 你会发现如果在线性范围内 , 连接就是直线;如果超出线性范围 , 则连接为曲线 。

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