校准曲线(标准曲线的12个经典问题)
1.制作标准曲线的依据是什么？
GB/T22554-2010基于标准样品的线性校准:
1)标准曲线的浓度范围应覆盖正常操作条件下的测量范围；
2)标准样品的成分尽可能与被测样品的成分一致；
3)标准样品的浓度值应在测量范围内均匀分布；
4)标准样品的数量应至少有三种浓度；
5)每个标准点至少重复两次 ， 这种重复意味着从稀释开始；
如果国家标准有相应的浓度系列推荐 ， 尽量遵循国家标准 。我们在工作中经常使用线性校准 ， 因为线性方程是最简单的 。
2.校准曲线是什么？
校准曲线包括标准曲线和工作曲线 。前者直接用标准溶液系列测量 ， 无需预处理过程 ， 往往会对样品造成较大误差 。后者使用的标准溶液经过了与样品相同的整个过程 ， 如消化、纯化和测量 。
3.首先 ， 投标时要做多少分？
标准曲线需要几个数据点 ， 这些数据点与被测成分的浓度范围、分析仪响应特性、干扰因素、浓度和检测信号响应类型有关 。
三点:对于一些低浓度 ， 特别是微量分析 ， 浓度范围不是很大 ， 探测器响应可靠 ， 背景干扰很小 ， 可以选择较少的工作点 ， 一般三个浓度点就足够了 ， 有的甚至只需要一个浓度点 ， 另一个点直接使用坐标原点 。
4~6分:若平时测得的样品浓度范围较宽 ， 且探测器的响应不完全是线性曲线 ， 可采用二次曲线或分段修正 ， 以减小数据偏差 。在这种情况下 ， 需要使用更多的数据点 。如果不分段 ， 4~6个数据点就够了 。
至少两点:但如果是分段校正 ， 每段至少需要两个数据点 。对于一些浓度范围不规则的样品 ， 特别是一些检测机构 ， 如果分析仪的检测响应可靠 ， 环境因素影响不大 ， 可以制作校准曲线 。如果环境因素影响较大 ， 则无需制作校准曲线 ， 而更容易使用标准加入法或标准加入-一次稀释法 。
其实我们一般做五分(不含零浓度)；一般第一点是检出限的5~10倍 ， 然后会增加1倍 ， 最高浓度是最低浓度的10~20倍(以理化分析实验为例) 。当然要根据仪器的灵敏度来调整 。
4.标准音乐的R值是多少9才算合格？
实验室应根据检测标准(方法)的要求 ， 使用标准溶液或标准物质建立标准曲线 。所用的标准溶液或参考材料应覆盖测试样品的浓度范围 。如果对检测标准(方法)没有具体要求 ， 至少要用5个标准样品(除空白色外)建立线性标准曲线 ， 每个点重复测量1-3次 。对于筛选法 ， 线性回归方程的相关系数应不低于0.98 ， 对于确认法 ， 相关系数应不低于0.99 。
其实大于0.99是判断是否线性相关的标准 ， 实际应用中线性大于0.999是比较理想的 。线性度在0.99 ~ 0.999之间的监测结果 ， 只有接近最高浓度(中等浓度)的一半时才是准确的 。如果线性度大于0.999 ， 在整个线性范围内都会有令人满意的结果 。
如果检测的线性不好 ， 可以降低标准品的覆盖率 ， 将标准品浓度调整到待测样品浓度附近 ， 这样结果也很准确 。例如 ， 样品浓度约为20ppb ， 但标准曲线建立在0~50ppb范围内 ， 但线性不理想 。此时 ， 标准范围可调整为15~25ppb作为五个标准 。
5.标准曲线的检验？
(1)线性测试:
也就是检查校准曲线的精度 。对于通过测量从4 ~ 6个浓度单位获得的信号值绘制的校准曲线 ， 分光光度法一般要求其相关系数|r|≥0.9990 ， 否则应找出原因并进行校正 ， 合格的校准曲线应重新绘制 。
(2)截取测试:
也就是说 ， 检查校准曲线的准确性 。在通过线性检验的基础上 ， 对其进行线性回归 ， 得到回归方程y=a+bx 。然后对截距A和0进行t检验 。当取95%置信水平时 ， 当测试后无显著差异时 ， A可做0处理 ， 将方程简化为y=bx ， 移位项为X = Y/B ， 在线性范围内 ， 不用参考校准曲线 ， 直接用空白色校正样品的实测信号值即可计算出样品浓度 。
当A与0存在显著差异时 ， 意味着校准曲线回归方程计算结果的准确性不高 。找出校正原因后 ， 重新绘制校准曲线 ， 通过线性测试 。计算回归方程并通过截距检验后 ， 即可投入使用 。
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