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三叶青的组织培养与快速繁殖研究

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三叶青又名有角乌蔹莓、石老鼠，为葡萄科崖爬藤属植物三叶崖爬藤 。主要分布于长江以南地区，但多年来三叶青被毁灭性挖取，种源稀少 。笔者应用组织培养进行快速繁殖研究，以期解决资源紧缺问题 。1材料 。1.1药材：试验材料采自安徽省，外植体取茎尖、带腋芽的茎段和叶片 。1.2培养基：基本培养基为MS按不同处理方案添加不同类型的植物激素，用0.1NNaOH和0.1NHCL调节pH值为5.8~6.0，在高压灭菌锅中高温（121℃）灭菌20min 。上述培养基均加3％蔗糖、1％琼脂，培养室温度25℃左右，每天光照13h，光照强度20001x左右 。移栽基质经过灭菌消毒处理，按m（珍珠岩）：m（草炭）：m（菜园土）=1∶1∶1比例混合 。2试验方法与结果 。2.1样品处理：取茎尖、茎段（带芽）和叶为外植体，按下列程序进行消毒：选材→自来水粗洗→用5%洗衣粉水溶液漂洗5 min →用自来水漂洗30 min →用75%乙醇擦洗表面→用0.1%氯化汞溶液消毒5min→用2%次氯酸钠溶液消毒20min→用无菌水漂洗4~6次，然后将外植体在无菌工作台上切成长度为0.5~1.0cm的小块 。2.2芽诱导培养:将不同部位的外植体接种到表1的各培养基中，观察出芽情况，计算芽诱导率 。不同外植体愈伤组织诱导不同，试验结果如下:3号培养基激素浓度配比(见表2) 。2.3继代增殖:将诱导的愈伤组织和芽簇转移到含有三种不同激素组合的新培养基中进行继代培养 。将原代培养的芽簇分离切割成2厘米的茎段，接种到MS+NAA0.2培养基中；；MS+6-BA0.02+NAA 0.5；MS+6-BA2+NAA 0.2 .接种后，在20~28℃的室温下进行全天光照 。一周后，腋芽萌发，萌发的分蘖迅速生长 。2.4生根培养:不同激素组合对其生根状况影响较大(表4) 。将诱导的存活丛生芽切成单芽，然后转移到表3中的每种培养基中(每瓶一个芽) 。30天后，4号培养基生根率高达74% 。2.5移栽定植:待芽长到3 ~ 4厘米时，将健康植株剪掉，转移到生根培养基中，所有植株都能正常生长 。培养1周后，可以诱导根 。10天后，每株可长出3 ~ 5根，长4 ~ 5厘米 。再培育一周，植株健壮，叶片深绿色，然后揭去纸盖，练苗 。轻轻洗去根部培养基，移至蛭石小盆中，盖上塑料薄膜和烧杯，高温保存，10天后揭去塑料薄膜和烧杯，移栽到田间 。苗木成活率达95% 。3概述 。
诱导白三叶不同部位的外植体 。在相同的消毒处理和相同的培养基下，最佳外植体为茎尖 。在原代培养过程中，3号培养基最好，4号培养基生根最好 。BA三叶草在继代培养中的作用可以忽略，可以认为MS+NAA0.2是最佳的继代培养基 。
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