双缩脲试剂检测蛋白质原理实验报告 双缩脲试剂检测蛋白质原理
缩二脲试剂的配制:将10g氢氧化钠置于量筒中，加水至100mL，充分熔化，倒入试剂瓶中，配制成质量浓度为0.1g/mL的氢氧化钠溶液 。用橡皮塞塞住瓶口，贴上标签，写上试剂a 。
将1g硫酸铜置于量筒中，加水至100mL，充分熔化，倒入试剂瓶中，制成质量浓度为0.01g/mL的硫酸铜溶液(蓝色) 。
用橡皮塞塞住瓶口，贴上标签，记下试剂b 。蛋白的详细反应与双缩脲试剂的反应一样为紫色反应 。
缩二脲实验原理:缩二脲(NH2-CO-NH-CO-NH2)在碱性溶液中能与铜离子自然形成紫白色络合物 。这个反应叫缩二脲实验，缩二脲实验，影响肽键 。尿素也有类似的肽键结构，能与铜离子自然形成紫白色的络合物 。缩二脲试剂由缩二脲试剂A和缩二脲试剂b组成，缩二脲试剂A是氢氧化钠质量分数为0.1 g/mL的水溶液 。缩二脲试剂B是硫酸铜质量分数为0.01 g/mL的水溶液 。缩二脲试剂可以证实蛋白的存在 。尿素不含蛋白，所以尿素不能与缩二脲试剂反应 。
双缩脲试剂中没有蛋白，所以蛋白的浓度为0 。缩二脲试剂A是氢氧化钠质量分数为0.1g/mL的水溶液；缩二脲试剂B硫酸铜的质量分数为0.01g/mL水溶液 。先将3mL缩二脲试剂加入3mL结构样品溶液中，摇匀(需要建立碱性条件) 。然后取2~3滴缩二脲试剂B，摇匀 。如果结构中含有蛋白，你会看到溶液变成紫色 。具有两个或两个以上肽键的化合物可与紫白色缩二脲试剂反应 。在碱性溶液中，蛋白的肽键可与Cu2+络合形成紫白色络合物 。颜色的深浅与蛋白的浓度成正比 。双缩脲法的测量范围可达1～10毫克蛋白，操作简单快捷 。
根据实验原理，蛋白在碱性前提下与二价铜离子反应，检测蛋白的含量 。
【双缩脲试剂检测蛋白质原理实验报告 双缩脲试剂检测蛋白质原理】硫酸铜是缩二脲试剂的真正影响，而氢氧化钾只是用来补充碱度 。因此，使用缩二脲试剂时，需要先加入0.1g/mL的氢氧化钠溶液，再加入0.01g/mL的硫酸铜水溶液 。
如果先参加硫酸铜溶液，再参加氢氧化钠溶液，就不能做出完全碱性的情况 。此时硫酸铜和氢氧化钠会发生重析反应，蓝色氢氧化铜会积累，导致现场不清晰，达不到测试目标 。
菲试剂和缩二脲试剂都是由NaOH溶液和CuSO4溶液组成，但它们之间有三个区别:
(1)溶液浓度的差异
燃烧试剂中的NaOH溶液称为燃烧试剂A，浓度为0.1g/ml，CuSO4溶液称为燃烧试剂B，浓度为0.05g/ml；；；在缩二脲试剂中，NaOH溶液(缩二脲试剂A)和CuSO4溶液(缩二脲试剂B)的浓度被分成0.1g/ml和0.01g/ml 。
(2)应用原理的差异 。
燃烧试剂是新配制的Cu(OH)2溶液，在加热的前提下与醛基反应，回收成砖白色的Cu2O沉淀，可用于测定可溶性回收糖的存在 。可溶性回收糖用灼烧试剂鉴定时，溶液变色过程为浅蓝色→棕色→砖白色(堆积) 。
在判断生物结构中是否含有蛋白时，常采用缩二脲法，并使用缩二脲试剂进行缩二脲实验 。缩二脲实验的实质是Cu2+在碱性条件下与缩二脲试剂反应生成紫色 。蛋白分子中有许多与缩二脲(H2NOC-NH-CONH2)相似的肽键，所以蛋白能与缩二脲试剂发生显色反应，通过过程缩二脲试剂可以确定蛋白的存在 。
(3)应用方法的差异 。
使用Lin试剂时，先将NaOH溶液与CuSO4溶液混合(将4 ~ 5滴CuSO4溶液滴入2mL NaOH溶液中)，然后破碎 。应用缩二脲试剂时，先取部分NaOH溶液(2 ml)，摇匀，发现碱性反应，再取部分3~4滴CuSO4溶液，摇匀，检验现场 。
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