逆转录的原理及主要过程(逆转录的基本过程)

原理:提取组织或细胞中的总RNA,以其中的mRNA作为模板,采用Oligo或随机引物利用逆转录酶反转录成cDNA。再以cDNA为模板进行PCR扩增,而获得目的基因或检测基因表达。过程:在逆转录酶作用下以dNTP为底物,RNA为模板,tRNA为引物。
逆转录的原理及主要过程(逆转录的基本过程)
文章图片
按5′→3′方向,合成一条与RNA模板互补的DNA单链。然后它与RNA模板形成RNA DNA杂交体,随后又在反转录酶的作用下,水解掉RNA链,再以此DNA为模板合成第二条DNA。逆转录过程是病毒的复制形式之一,如RNA病毒中的逆转录病毒,DNA病毒中的嗜肝DNA病毒和花椰菜花叶病病毒的复制均需要经过逆转录。
逆转录的原理及主要过程(逆转录的基本过程)
文章图片
逆转录过程在真核细胞中也同样存在,例如逆转座子和端粒DNA的延长均存在逆转录过程,需逆转录酶的催化。逆转录过程的揭示是分子生物学研究中的重大发现,是对中心法则的重要修正和补充。
逆转录的原理及主要过程(逆转录的基本过程)
文章图片
【逆转录的原理及主要过程(逆转录的基本过程)】人们通过体外模拟该过程,以样本中提取的mRNA为模板,在逆转录酶的作用下,合成出互补的cDNA,构建cDNA文库,并从中筛选特异的目的基因。该方法已成为基因工程技术中最常用的获得目的基因的策略之一。

    推荐阅读