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双缩脲试剂检测蛋白质原理是什么?

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双缩脲试剂检测蛋白质原理是什么?

文章插图
双缩脲试剂本是用来检测双缩脲，由于蛋白质分子中含有很多与双缩脲结构相似的肽键，因此也能与铜离子在碱性溶液中发生双缩脲反应 。
在碱性溶液中双缩脲与铜离子结合形成复杂的紫好色复合物 。而蛋白质及多肽的肽键与双缩脲的结构类似，也能与Cu2+形成紫红色络合物，其最大光吸收在540nm处 。其颜色深浅与蛋白质浓度成正比，而与蛋白质的分子量及氨基酸的组成无关，该法测定蛋白质的浓度范围适于1~10mg /mL 。双缩脲法常用于蛋白质的快速测定 。
双缩脲试剂检测注意事项
【双缩脲试剂检测蛋白质原理是什么?】在使用双缩脲试剂时候，必须注意，必须是先加0.1 g/mL氢氧化钠溶液，再加0.01 g/mL硫酸铜的水溶液 。
若先加入硫酸铜[CuSO4]溶液，再加入氢氧化钠[NaOH]溶液，则无法充分制造碱性环境，此时CuSO4会与NaOH发生复分解反应，生成蓝色氢氧化铜[Cu(OH)2]沉淀，导致现象不清，无法较好地达到实验目的 。
以上内容参考百度百科-双缩脲试剂
蛋白质的肽键与双缩尿类似，可与铜离子在碱性环境下(双缩尿试剂)生成紫色络合物.稀氢氧化铜溶液(斐林试剂)有弱氧化性可与还原性糖中的醛基发生反应，生成砖红色的氧化亚铜沉淀 。
双缩脲试剂是一种用于鉴定蛋白质的分析化学试剂 。它是一种碱性的含铜试液，呈蓝色，由0.1 g/mL氢氧化钠或氢氧化钾、0.01 g/mL硫酸铜和酒石酸钾钠配制而成 。
扩展资料
双缩脲反应主要涉及肽键，因此受蛋白质特异性影响较小 。且使用试剂价廉易得，操作简便，可测定的范围为1～10mg蛋白质，适于精度要求不太高的蛋白质含量的测定，能测出的蛋白质含量须在约0.5mg以上 。可通过比色法分析浓度，在紫外可见光谱中的波长为540nm 。
双缩脲法的缺点是精确度低、所需样品量大 。干扰此测定的物质包括在性质上是氨基酸或肽的缓冲液，如TrIs缓冲液，因为它们产生阳性呈色反应，铜离子也容易被还原，有时出现红色沉淀 。
参考资料来源：百度百科-双缩脲试剂
紫色络合物分子结构式在碱性溶液（NaOH）中，双缩脲（H2NOC－NH－CONH2）能与铜离子（Cu2+）作用，形成紫色络合物（该物质的分子结构式见图），该反应即双缩脲反应 。
双缩脲反应是肽和蛋白质所特有的，而为氨基酸所没有的一种颜色反应 。一般分子中含有两个氨基甲酪基（即肽键：-CO-NH-）的化合物与碱性
铜溶液作用，就会形成紫色或蓝紫色络合物 。
注：除-CO-NH-有此反应外，（-CONH2-）、（-CH2-）、（-NH2-）、（-CS-CS-NH2）等基团亦有此反应 。

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