血细胞计数器(自动血细胞计数器)
看下降的详细解释！
01清洁实验环境
在层流安全柜内彻底喷洒消毒剂，并用纸巾擦拭 。将用过的纸巾放入合适的垃圾桶 。
将70%乙醇喷入安全柜，用纸巾擦拭 。安全柜现在干净了，可以使用了 。
细胞悬浮液的处理
从冰箱中取出细胞培养基和胰蛋白酶，放入37℃的二氧化碳培养箱中加热 。
用显微镜观察待计数的细胞，检查是否有可见的细菌和真菌污染迹象 。
用70%乙醇喷洒培养基瓶和移液管，并将其放入安全柜中 。
轻轻摇动培养瓶，确保悬浮细胞充分混合 。
在悬浮细胞沉淀之前，取0.5毫升细胞悬液样品，将其储存在无菌微量离心管中 。
去除粘附细胞上残留的培养基 。
室温下用DPBS溶液洗涤，加入EDTA胰蛋白酶分离细胞(DPBS溶液和蛋白酶用量见表) 。
放入37℃的二氧化碳培养箱中2~5分钟 。(培养时间取决于细胞类型) 。
取出在倒置显微镜下观察 。发现细胞突起回缩，细胞间隙增大，细胞从培养瓶底部分离成单细胞 。
所有细胞分离后，在含10%胎牛血清的培养基中于37℃中和EDTA胰蛋白酶(剂量见表) 。
上下摇动细胞悬液三次，使细胞复活，然后转移到15毫升试管中 。
在室温下，细胞悬浮液以每分钟1000转的速度离心5分钟 。
离心后，丢弃细胞悬浮液 。
然后，将细胞颗粒悬浮在含有10%胎牛血清的37℃培养基中至原始培养体积 。
用5 ml无菌移液管取0.5 ml细胞悬液样品，转移至无菌微量离心管 。
03准备血细胞计数器
如果使用玻璃血细胞计数器和盖玻片，请在使用前用酒精清洗 。用水浸湿盖玻片，并将盖玻片固定在血细胞计数器上 。如果盖玻片下出现牛顿折射环，则表明盖玻片已正确附着 。
如果使用一次性血细胞计数器(如INCYTO DHC-N01)，使用前只需从包装中取出即可 。
04开始计数 。
将100升细胞放入新的微量离心管中，加入400升0.4%台盼蓝(最终浓度0.08%)，轻轻混合 。
小心地将一滴悬浮液滴入计数室的孔中，这样细胞悬浮液就可以通过毛细作用被吸入 。
用倒置显微镜，聚焦在10x物镜下血细胞计数器的4*4网格线上 。计算未染色的活细胞 。
计数时，只计算框中或右边界和下边界的单元格 。
同样，如果需要，可以对台盼蓝染色的死亡细胞进行计数，以估计活细胞的比例 。
将血细胞计数器移到下一组方块(16)并继续计数，直到所有四组方块(每组16个)都已计数完毕 。
05计算活细胞的数量 。
计算每组方块(16)中细胞计数的平均值，并记录它们的值以计算细胞浓度 。
取4组16个正方形的活细胞平均数，乘以10000，得到每毫升细胞数 。
当加入台盼蓝时，乘以5以校正1:5的稀释度 。最终值是原始细胞悬液中活细胞的数量/毫升 。示例:
如果每16个方格的细胞计数为50、40、45和52，则平均细胞计数为:
(50 + 40 + 45 +52) 4 = 46.75
46.75 x 10000 (104) = 467500
467500×5 = 2337500个活细胞/毫升
06计算细胞活力 。
【全自动血球计数仪 血球计数仪】
将活细胞数和死细胞数相加，得到总细胞数 。
通过细胞计数除以总细胞计数来计算活性百分比 。
示例:
细胞计数:2337500细胞/毫升
死亡细胞数:50000细胞/毫升
237500+50000 = 2387500个单元格
237500 2387500 = 97.9%活力
-结束-
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