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Rnase:即RNA水解酶
包括几种,RNase A和RNase H
RNase H是一种核糖核酸内切酶,它能够特异性地水解杂交到DNA链上的RNA磷酸二酯键,故能分解RNA/DNA杂交体系中的RNA链.该酶不能消化单链或双链DNA.
RNase A是一种被详细研究和具有广泛应用的核酸内切酶.RNase A 对RNA有水解作用,但对DNA则不起作用.RNase A在C端和U端残基处专一地催化RNA的核糖部分3'-与5' -磷酸二酯键的裂开,形成具有 2',3'-环磷酸衍生物寡聚核苷酸.可以用来去除DNA制品中的污染RNA.
指能水解RNA磷酸二酯键的酶称核糖核酸酶(ribonuclease,RNAse) 。不同的RNAse其专一性不同,例如牛胰核糖核酸酶(RNAse I) 。
它的作用位点是嘧啶核苷3’一磷酸与其他核苷酸之间的连接键,而核糖核酸酶T1(RNAse T1)的作用位点是3’鸟苷酸与其他相邻核酸之间的5’一OH间的连键 。
核糖核酸酶A的主要用途为
1、从DNA:RNA杂交体中去除未杂交的RNA区 。
2、确定RNA或DNA中的单碱基突变的位置 。在RNA:DNA或RNA:RNA杂交体中,若存在单碱基错配,可用RNAse A识别并切割 。通过凝胶电泳分析切割产物的大小,即可确定错配的位嚣 。
3、RNA检测 。RNA酶保护分析法(RNAse protection assay)是近年来发展起来的一种检测RNA的杂交技术 。
其基本原理是利用单链RNA探针,与待测的RNA样品进行杂交形成RNA:RNA双链分子,由于RNA酶可专一性地降解未杂交的单链RNA,而双链受到保护不被降解,经凝胶电泳可以确定目的RNA的长度 。
该方法灵敏度较Northern杂交法更高,并可进行较为准确的定量 。选择适当的探针,还可进行基因转录起始位点分析及内含子(也称内元)剪切位点分析等研究 。此法的灵敏度比核酸酶S1保护分析法高数倍 。
4、降解DNA制备物中的RNA分子 。须使用无DNAsd的RNAse(DNase I free RNAse),市售的一般RNAse A常含有DNAse,可在100 retool/I Tris—CI(pH 7.5)和15 mmol/l 。NaCI溶液中100℃加热15 min,以去除之 。
厂家网页上有,最佳60,在15-70度都有活性
【什么是RNase】http://www.sigmaaldrich.com/etc/medialib/docs/Sigma/Datasheet/5/r5500dat.Par.0001.File.tmp/r5500dat.pdf
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