核酸杂交(什么是核酸分子杂交)
一、分子杂交的原理
分子杂交是一种核酸和蛋白质的分析方法 ， 用于检测混合样品中特定核酸分子或蛋白质分子的存在及其相对含量 。其基本原理是待检测的单链核酸或蛋白质分子与已知序列的单链核酸或抗体(称为探针)通过碱基配对或免疫反应形成可检测信号 。在分子杂交过程中 ， 核心是印迹转移技术 ， 先在凝胶上分离DNA、RNA和蛋白质 ， 使相对分子量不同的分子铺展在凝胶上 ， 再将凝胶上的样品通过影印的方式转移到固相支持物上 。经过这个印迹过程 ， 标记的探针或抗体与滤膜上的核酸或蛋白质分子杂交 ， 从而判断样品中是否存在与该探针同源的核酸分子或与抗体反应的蛋白质分子 ， 并猜测相对分子量 。
二、分子杂交的发展过程
【什么是核酸分子杂交 核酸杂交】核酸杂交技术是Hall等人在1961年研究的 。该方法的原理是探针与溶液中的靶序列杂交 ， 通过平衡密度梯度离心分离杂交体 ， 检测靶序列的含量 。这种方法费时、费力、不准确 ， 但发展了核酸杂交技术的研究 。20世纪60年代中期 ， 尼加德等人的研究为应用标记的DNA或RNA探针检测固定在硝酸纤维素(NC)膜上的DNA序列奠定了基础 。20世纪70年代 ， 分子生物学技术取得了突破 。固定化的聚U-Sepharose和寡(dT)-纤维素使人们能够从总RNA中分离出聚A+mRNA ， 这可用于检测mRNA的表达 。限制性内切酶的发展和应用使分子克隆成为可能 。各种载体系统的诞生 ， 特别是质粒和噬菌体载体的构建 ， 丰富了特异性DNA探针的来源 。人们可以从基因组DNA文库和c DNA文库中获得特定的基因克隆 ， 仅仅通过培养细菌就可以提取大量的探针DNA 。目前 ， 核酸杂交技术在用非放射性物质代替放射性同位素标记探针、简化实验操作、缩短杂交时间等方面取得了很大进步 ， 使得核酸杂交技术越来越简单、快速、廉价、安全 。将电泳分离的蛋白质组分转移到固定膜上 ， 即Western blot(即蛋白质印迹) 。1979年由四个研究小组(Houvet D ， Renart J ， Erlich H ， Towbin H)首次报道 ， 但现在Towbin H等人使用的方法被广泛使用 。这种方法实际上是在1975年由Southern DNA印迹法发展而来的 。因此 ， Western杂交并不是真正的分子杂交 ， 而是检测滤膜上是否存在抗体探针识别的蛋白质的免疫反应 。
三.分子杂交的类型
根据检测的对象 ， 分子杂交可以分为以下几类 。(1)Southern印迹:电泳分离DNA片段 ， 从凝胶转移到硝酸纤维素滤膜或尼龙膜上 ， 然后与探针杂交 。检测的对象是DNA ， 探针是DNA 。
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