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细胞培养的步骤 动物细胞培养

细胞培养步骤动物

动物培养(细胞培养步骤)
动物细胞培养是从动物体内取出相关组织 ， 分散成单个细胞(使用胰蛋白酶或胶原酶) ， 然后放入合适的培养基中 ， 让这些细胞生长增殖 。
种族发生
1907年 ， 哈里森在无菌条件下用淋巴液作为培养基 ， 培养蛙胚神经组织存活数周 ， 观察神经细胞突起的生长过程 。因此 ， 他建立了用盖片覆盖凹洞的玻璃悬滴培养法 ， 为动物离体组织培养奠定了基础 。后来有人把悬滴培养法改进为双盖培养 ， 提高了传代效率 ， 减少了污染 。1923年 ， 卡雷尔设计了卡尔瓶培养法 ， 扩大了组织存活空室 。1951年 ， 厄尔发明了体外培养动物细胞的合成培养基 。1951年 ， Pomerat设计了灌注室 ， 使细胞生活在不断更新的培养基中 ， 便于显微照相和细胞代谢研究 。1957年 ， Graff利用灌注技术进一步提高了细胞悬浮培养的效率 。1957年 ， 杜尔贝科等人利用胰蛋白酶消化和液体培养基获得单层细胞培养 。单层培养的出现极大地促进了组织培养的发展 。此后 ， 单层培养被广泛用于组织培养 。20世纪60年代以后 ， 动物细胞的大规模培养技术开始逐步发展 。20世纪80年代以后 ， 随着基因工程等细胞工程技术的发展 ， 细胞培养技术成为转基因技术、生物制药等诸多技术的基础 ， 在现代生物技术中发挥着重要作用 。
培养液的组成
细胞体外培养所需的营养物质与体内基本相同 ， 如糖、氨基酸、无机盐、促生长因子、微量元素等 。根据细胞的类型和所需的数量 ， 由细胞所需的上述物质严格制备的培养基称为合成培养基 。因为动物细胞生存的内部环境中还有一些成分没有研究清楚 ， 所以需要加入动物血清来提供一个类似于生物体内的环境 。因此 ， 在使用合成培养基时 ， 通常需要加入一些天然成分 ， 如血清和血浆 。
培养基的特性
液体培养基 ， 通常含有动物血清 。
文化状况
无菌无毒环境:对培养基及所有培养用具进行无菌处理 ， 通常在培养基中加入一定量的抗生素 ， 防止污染 。此外 ， 应定期更换培养基 ， 以去除代谢物 ， 防止细胞代谢物的积累损害细胞本身 。
营养:无机物(无机盐、微量元素等) 。) ， 有机物质(糖、氨基酸、促生长因子等) 。)
以及血清和血浆(提供细胞生长所必需的营养物质) 。
以及温度和酸碱度(36.5±0.5℃ ， 7.2 ~ 7.4)
大气(95% 空气体+5% CO混合气体)
5%的一氧化碳气体用于保持培养基的酸碱度稳定 。
基本过程
取动物胚胎或幼小动物的器官和组织 。将材料切割并用胰蛋白酶(或胶原酶)处理(消化)以形成分散的单细胞 ， 并将处理过的细胞转移到培养基中以制备一定浓度的细胞悬浮液 。悬浮液中分散的细胞迅速粘附在瓶壁上 ， 这称为细胞粘附 。当贴壁细胞分裂生长相互接触时 ， 细胞会停止分裂增殖 ， 发生接触抑制 。此时 ， 接触抑制的细胞需要再次用胰蛋白酶处理 。然后 ， 制备一定浓度的细胞悬液 。此外 ， 原代培养是从体内取出后立即进行的细胞和组织培养 。当细胞从动植物中生长迁移 ， 形成生长晕并不断增多时 ， 科学家们继续进行继代培养 ， 即将原代培养的细胞分成若干部分 ， 接种到若干份培养基中 ， 使其继续生长增殖 。通过某些选择或纯化方法 ， 从原代培养物或细胞系中获得的具有特殊性质的细胞被称为细胞系 。培养50代以上 ， 大部分细胞已衰老死亡 ， 但也有部分细胞发生了遗传物质改变 ， 呈现无限传代的特点 ， 即癌变 。此时的细胞称为细胞系 。
在培养基中添加胰岛素可以促进细胞对葡萄糖的吸收 。
分类
1根据细胞类型:原代细胞培养 ， 传代细胞培养 。
原代细胞:将各种动物组织取出体外 ， 用各种酶(常用胰蛋白酶)、螯合剂(常用EDTA)或机械方法处理 ， 分散成单细胞 ， 在合适的培养基中培养 ， 使细胞存活、生长和繁殖 。这个过程叫做初级培养 。培养的细胞为正常动物细胞 ， 一般培养10代后不再增殖和死亡 。

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